综合网av_一区二区三区四区在线_黄色大片在线免费看_美女福利视频_爱爱视频在线播放_裸体在线国模精品偷拍

公司新聞

CCK8檢測細胞增殖/毒性的原理、方法及注意事項

CCK8檢測細胞增殖/毒性的原理、方法及注意事項

一、CCK8檢測細胞增殖/毒性的原理
Cell Counting Kit-8(簡稱CCK-8)試劑可用于簡便而準確的細胞增殖和毒性分析。其基本原理為:該試劑中含有WST-8【化學名:2-(2-甲氧基-4-硝基苯基)-3-(4-硝基苯基)-5-(2,4-二磺酸苯)-2H-四唑單鈉鹽】,它在電子載體1-甲氧基-5-甲基吩嗪鎓硫酸二甲酯(1-Methoxy PMS)的作用下被細胞中的脫氫酶還原為具有高度水溶性的黃色甲瓚產物(Formazan dye)。生成的甲瓚物的數量與活細胞的數量成正比。因此可利用這一特性直接進行細胞增殖和毒性分析。

用途:**篩選、細胞增殖測定、細胞毒性測定、腫瘤藥敏試驗

CCK8的優點:
使用方便,省去了洗滌細胞,不需要放射性同位素和有機溶劑;
CCK-8法能快速檢測;
CCK-8法的檢測靈敏度很高,甚至可以測定較低細胞密度;
CCK-8法的重復性優于MTT法;
CCK-8法對細胞毒性小;
CCK-8細胞活性檢測試劑中為1瓶溶液,毋需預制,即開即用。
 CCK8的缺點:
與MTT法相 比,CCK8和XTT的價格比較貴。
CCK8試劑的顏色為淡紅色,與含酚紅的培養基顏色接近,不注意的話容易產生漏加或多加。
 
與以往的增殖/毒性測定試劑相比較:


二、CCK8檢測細胞增殖/毒性的方法
實驗一:細胞增殖分析
1、制備細胞懸液:細胞計數
2、接種到96孔板中:根據合適的鋪板細胞數,每孔約100ul細胞懸液,同樣的樣本可做3個重復。
3、37℃培養箱中培養:細胞接種后貼壁大約需要培養2-4小時,如果不需要貼壁,這步可以省去。
4、加入10ul CCK8:由于每孔加入CCK8量比較少,有可能因試劑沾在孔壁上而帶來誤差,建議在加完試劑后輕輕敲擊培養板以幫助混勻。或者直接配置含10%CCK8的培養基,以換液的形式加入。
5、培養1-4小時:細胞種類不同,形成的Formazan的量也不一樣。如果顯色不夠的話,可以繼續培養,以確認*佳條件。特別是血液細胞形成的Formazan很少,需要較長的顯色時間(5-6小時)。
6、測定450nm吸光度:建議采用雙波長進行測定,檢測波長450-490nm,參比波長600-650nm。

實驗二:細胞毒性分析
1、制備細胞懸液:細胞計數
2、接種到96孔板中:根據合適的鋪板細胞數,每孔約100ul細胞懸液,同樣的樣本可做3個重復。
3、37℃培養箱中培養:細胞接種后貼壁大約需要培養2-4小時,如果不需要貼壁,這步可以省去。
4、加入不同濃度的毒性物質
5、37℃培養箱中培養:加入毒性物質的培養時間,要看毒性物質的性質和細胞的敏感性,一般要根據細胞周期來決定,起碼要一代以上的時間。
6、加入10ul CCK8:由于每孔加入CCK8量比較少,有可能因試劑沾在孔壁上而帶來誤差,建議在加完試劑后輕輕敲擊培養板以幫助混勻。
7、培養1-4小時:細胞種類不同,形成的Formazan的量也不一樣。如果顯色不夠的話,可以繼續培養,以確認*佳條件。特別是血液細胞形成的Formazan很少,需要較長的顯色時間(5-6小時)。
8、測定450nm吸光度:建議采用雙波長進行測定,檢測波長450-490nm,參比波長600-650nm。

注:
若暫時不測定OD值,可以向每孔中加入10 μL 0.1M的HCL溶液或者1% w/v SDS溶液,并遮蓋培養板避光保存在室溫條件下。24小時內測定,吸光度不會發生變化。
如果待測物質有氧化性或還原性的話,可在加CCK8之前更換新鮮培養基(除去培養基,并用培養基洗滌細胞兩次,然后加入新的培養基),去掉**影響。當然**影響比較小的情況下,可以不更換培養基,直接扣除培養基中加入**后的空白吸收即可。

三、CCK8檢測細胞增殖/毒性的注意事項
當使用標準96孔板時,貼壁細胞的*小接種量至少為1,000 個/孔 (100 μl 培養基)。檢測白細胞時的靈敏度相對較低,因此推薦接種量不低于2,500 個/孔 (100 μl 培養基)。
酚紅和血清對CCK8法的檢測不會造成干擾,可以通過扣除空白孔中本底的吸光度而消去。
CCK8可以檢測大腸桿菌,但不能檢測酵母細胞。在細胞增殖實驗每次測定的過程中需要避免**污染,以免影響結果。
CCK-8在0-5℃下能夠保存至少6個月,在-20℃下避光可以保存1年。
當在培養箱內培養時,培養板*外一圈的孔*容易干燥揮發,由于體積不準確而增加誤差。一般情況下,*外一圈的孔只加培養基,不作為測定孔用。
在培養基中加入CCK8,培養一定的時間,測定450 nm的吸光度即為空白對照。在做加藥實驗時,還應考慮**的吸收,可在加入**的培養基中加入CCK8,培養一定的時間,測定450 nm的吸光度作為空白對照。
金屬對CCK-8顯色有影響:當終濃度為1 mM的氯化亞鉛、氯化鐵、硫酸銅會抑制5%、15%、90%的顯色反應,使靈敏度降級。如果終濃度是10 mM的話,將會100%抑制。
懸浮細胞由于染色比較困難,一般需要增加細胞數量和延長培養時間。


滬公網安備 31011702004356號

主站蜘蛛池模板: 亚洲一区二区三区精品视频 | 99免费视频 | 亚洲一区二区视频 | 亚洲91 | 国产精品高潮呻吟 | 欧洲亚洲一区 | 国产一级做a爰片在线看免费 | 国产日韩精品一区 | 国产成人一区 | av免费在线观看网站 | 电影午夜精品一区二区三区 | 91se在线 | 一区二区中文字幕 | 91九色在线观看 | 午夜av电影 | 国产精品久久久久久久午夜片 | 婷婷在线免费视频 | 欧美精品在线免费观看 | 亚洲免费视频在线观看 | 欧美激情a∨在线视频播放 中文字幕网在线 | 亚洲午夜精品 | 美女网站视频免费黄 | 可以免费在线观看av的网站 | 99亚洲| 国产成人在线免费观看视频 | 91在线精品一区二区 | 成人看的羞羞视频免费观看 | 精品国产91亚洲一区二区三区www | 精品久久久久久久久久久久 | 成人免费视频网站 | 色综合天天天天做夜夜夜夜做 | 日本成人中文字幕 | 欧美一区久久 | 日韩精品小视频 | 日韩一区二区福利 | 在线视频 中文字幕 | 国产一区二区亚洲 | 欧美一级二级片 | 麻豆精品一区二区 | 亚洲二区视频 | 精品视频一区二区 |