基于金磁—量子點雙標記的牛乳酪蛋白快速**檢測新方法研究
汪艷姣
上海師范大學
摘要：近年來,隨著人們的生活水平日漸提高以及牛乳制品的廣泛普及,牛乳過敏問題得到了人們的廣泛關注。本論文將量子點良好的光學特性與金磁微粒可被快速富集的優勢相結合,建立了基于金磁-量子點雙標記的牛乳酪蛋白快速**檢測的新方法,主要開展了以下幾個方面的工作:一、以巰基乙酸為穩定劑,采用水相合成法成功制備了表面帶有羧基的綠、黃、橙、紅四種熒光顏色的Cd Te量子點;采用一鍋法合成了氨基化的磁性復合微粒(Fe3O4-PEI),通過兩次包金過程,得到了多層復合型金磁納米微粒(Fe3O4-PEI-Au1-PEI-Au2)。并對其相關性能進行了表征與測試,實驗結果表明,所制備的量子點具有良好的光學性能,其激發光譜寬且連續,發射光譜窄而對稱,熒光強度較高、且不易聚沉;所制備的金磁微粒粒徑均一,具有良好的分散性和晶體結構且磁性好,能很好的用于磁性分離和生物修飾,為本論文后續的拓展與應用研究提供了保證。二、以橙色CdTe量子點為代表,小鼠IgG作為模式抗原,兔抗鼠IgG和羊抗鼠Ig G均作為模式抗體,可與小鼠Ig G上的不同位點相結合。其中,羊抗鼠Ig G偶聯Cd Te量子點得到熒光探針,兔抗鼠Ig G偶聯金磁微粒得到金磁探針,在此基礎上構建了金磁-量子點雙標記快速**檢測體并優化了兩探針的合成條件。金磁探針與小鼠Ig G相結合,并結合量子點熒光探針上的兔抗鼠Ig G,*終形成“三明治”式的復合物。根據復合物上熒光強度的大小,從而實現對小鼠Ig G的定量檢測。實驗結果表明,在優化的探針條件下,小鼠Ig G的量與熒光檢測信號呈正相關。由此說明基于金磁-量子點雙標記**檢測體系成立,有望用于實際樣品檢測中。三、在之前研究的基礎上,采用兩種可與牛乳酪蛋白不同作用位點結合的抗體,將其中單克隆抗體修飾到金磁微粒上作為捕獲探針,多克隆抗體修飾到量子點上作為熒光檢測探針,建立了一種基于“三明治夾心式”的牛乳酪蛋白**檢測新方法,并用于牛乳過敏原的實際檢測。結果得到酪蛋白含量在6.25~100ng/m L范圍內與熒光強度具有良好的線性關系,*低檢出限為1.8 ng/m L。通過和ELISA方法的對比以及加標回收實驗證明本檢測方法準確性好,穩定性強,重復性佳,可以用于實際樣品的檢測。該金磁-量子點雙標記**檢測體系可以為牛乳過敏原的檢測提供理論和現實依據。
關鍵詞：牛乳; 過敏原; 酪蛋白; 金磁納米微粒; 量子點; **檢測; 雙標記;
導師：魏新林; 王元鳳;
分類號：TS252.7
