定點(diǎn)突變?cè)噭┖挟a(chǎn)品介紹
    基因定點(diǎn)突變是一種對(duì)質(zhì)粒DNA序列上的指定堿基進(jìn)行體外定點(diǎn)替換、插入或缺失等序列改變的基因操作技術(shù)，在蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)與功能以及DNA表達(dá)調(diào)控研究中是一種非常重要的技術(shù)。基因定點(diǎn)突變?cè)噭┖性诓恍枰厥廨d體、不需要T4 DNA 連接酶、不需要亞克隆的條件下可以對(duì)指定堿基進(jìn)行突變。試劑盒使用了具有快速擴(kuò)增性、超高保真性和強(qiáng)大擴(kuò)增能力特點(diǎn)的Xerox DNA聚合酶，只需以甲基化質(zhì)粒為模板進(jìn)行一次PCR擴(kuò)增、一次酶切消化和一次轉(zhuǎn)化就可以在**之內(nèi)完成基因突變過(guò)程，整個(gè)過(guò)程非常簡(jiǎn)單。該試劑盒也可以同時(shí)對(duì)多個(gè)位點(diǎn)進(jìn)行突變。 
定點(diǎn)突變?cè)噭┖挟a(chǎn)品特點(diǎn)
    1. 采用完全重疊引物設(shè)計(jì)，使PCR呈指數(shù)擴(kuò)增，擴(kuò)增產(chǎn)物凝膠電泳可見(jiàn)；擴(kuò)增產(chǎn)物為環(huán)狀，易于轉(zhuǎn)化。
    2. 同類型產(chǎn)品只采用內(nèi)切酶或感受態(tài)細(xì)胞降解非突變型質(zhì)粒模板，而該試劑盒結(jié)合了上述兩種方法，從而更有效地降解甲基化的質(zhì)粒模板，突
      變效率更高，對(duì)照突變效率可達(dá)90%。
    3. 試劑盒中搭配高保真的2× Gold Pfu Mix，擴(kuò)增速度和保真性大大提高，Mix的形式只需加入引物和模板，使操作更簡(jiǎn)單。 
定點(diǎn)突變?cè)噭┖挟a(chǎn)品儲(chǔ)存
    BMXL10-Gold Competent Cell -70儲(chǔ)存，其他－20 ℃ 保存。 

引物設(shè)計(jì)

    1. 找到需要突變的堿基位點(diǎn)，在突變點(diǎn)兩側(cè)各15-20bp范圍內(nèi)設(shè)計(jì)一對(duì)引物，兩條引物中都包含要突變成的堿基。

    2. 引物長(zhǎng)度一般控制在25-45bp，兩條引物完全匹配區(qū)大約15-20bp，非匹配區(qū)至少10bp。兩條引物控制Tm值大于65℃，GC含量控制在40%以

       上。

    3. *好將突變位點(diǎn)設(shè)計(jì)在兩條引物完全匹配區(qū)的中心位置，以免突變位點(diǎn)脫落。

定點(diǎn)突變?cè)噭┖羞m用范圍

    甲基化質(zhì)粒中核苷酸德突變

質(zhì)控檢測(cè)

    利用Control plasmid和Control primer檢驗(yàn)突變效率，在含氨芐的平板上進(jìn)行藍(lán)白斑篩選，如突變成功菌落呈藍(lán)色。