Animal Blood Direct PCR Kit 全血直接PCR試劑盒

產品描述

  全血直接PCR試劑盒（Blood direct PCR Kit）可以直接對全血樣本進行PCR，無需進行DNA純化或樣品預處理，大大降低了污染風險，縮短時間和節約支出。
試劑盒中包含2 × Blood Master Mix，其中的血液DNA聚合酶專為全血DNA直接擴增而設計，對全血樣品中的PCR抑制劑具有超強的抵抗力，可擴增全血濃度高達40%。高度優化的反應體系使得Blood direct PCR Kit能夠從全血樣品中高效擴增長達7.5 kb的基因組片段。擴增產物為平端，適用于HieffCloneTM快速克隆試劑盒 (11001ES25/ 11002ES10)。另外，試劑盒中配有與哺乳動物和其他許多脊椎動物兼容的引物預混液Positive control primer mix，可用于進行陽性對照反應。Animal Blood Direct PCR Kit 全血直接PCR試劑盒
該試劑盒可用于直接擴增的血樣類型包括：新鮮血液、4℃貯存血液、冷凍血液以及儲存在Whatman 903®和FTA®商用卡上的干血漬，且兼容所有常規抗凝劑 (EDTA、檸檬酸鹽、肝素等)。Blood Direct PCR Kit已經在許多哺乳動物物種上進行了成功測試，并成功擴增了幾種禽類全血。
Animal Blood Direct PCR Kit 全血直接PCR試劑盒

運輸與保存方法
冰袋（wet ice）運輸。產品-20 oC保存。
質量控制
50 μl PCR體系中，以5 μl人全血為模板擴增7.5 kb片段。35個循環后將1/10 PCR產物進行1%瓊脂糖凝膠電泳，EB染色，可見有單一的7.5 kb條帶。
注意事項
1) 推薦血液模板使用量為反應總體積的1/10，即50 μl的反應體系內加入5 μl全血。如全血使用體積超過反應總體積的1/10，可能需要進一步調整Mg2+濃度。
2) 吸取抗凝血，尤其是長期存放過的抗凝血時，應盡量避免吸取血液凝塊。Animal Blood Direct PCR Kit 全血直接PCR試劑盒
3) 延伸時間按30 sec/kb設定，請勿使用更長的延伸時間。
4) PCR完成后，推薦將反應液于1,000 × g (大約4,000 rpm) 離心1～3 min以沉淀血細胞碎片，之后取上清進行下游分析。

全血擴增引物設計注意事項
1) 引物3’端*后一個堿基選擇C或G；
2) 引物3’端*后8個堿基應避免出現連續錯配；
3) 引物3’端盡量避免出現發夾結構；
4) 引物Tm值控制在60℃-72℃之間 (推薦使用軟件Primer Premier 5進行計算)；
5) 引物額外附加序列，即與模板非配對序列，不應參與引物Tm值計算；
6) 引物GC含量控制在40%-60%之間；
7) 正向引物和反向引物Tm值以及GC含量盡可能一致。

Animal Blood Direct PCR Kit 全血直接PCR試劑盒 操作方法

1. 反應體系配制：

所有組分解凍后請充分搖勻，使用完畢后及時放回-20℃。