Animal Tissue Direct PCR Kit 動物組織直接PCR試劑盒
產品描述
動物組織直接PCR試劑盒是一種可直接對不同動物組織進行PCR擴增的試劑盒,適應性廣、穩定性強。試劑盒中采用獨特的裂解緩沖液體系,可以簡便快速的裂解多種動物組織樣品并釋放出基因組DNA。整個過程不需要除去蛋白、RNA及其它次生代謝物,也無需有機溶劑抽提,即可得到質量穩定的基因組DNA,無需后續純化步驟即可直接用于PCR反應。而且樣品需求量小,少到5mg動物組織即可進行實驗。Animal Tissue Direct PCR Kit 動物組織直接PCR試劑盒
試劑盒中提供的 2×Tissue Master Mix 具有很強的擴增兼容性,能直接以待測樣品裂解液為模板,進行高效特異性擴增。該試劑為2倍濃縮PCR反應混合物,包含了用于PCR擴增除模板和引物外的所有組分,并以dUTP替代了dTTP,另外加入了能夠降解含有dUTP 模板的 UNG 酶(Uracil-N-glycosylase)。在PCR反應前,利用UNG酶降解含有尿嘧啶的PCR產物,UNG 酶對不含有尿嘧啶的模板不會造成任何影響,從而保證擴增的特異性和準確性,防止了大規?;驒z測時可能出現的PCR產物污染問題。優化的2×Tissue Master Mix與直接裂解液配合使用能夠快速簡便地對樣品進行檢測,并具有靈敏度高、兼容性強、特異性強、穩定性好等特點。
Animal Tissue Direct PCR Kit 動物組織直接PCR試劑盒可用于轉基因型鑒定、動物基因分型等多種大規?;驒z測。
運輸方法
冰袋(wet ice)運輸。
保存方法
① 本試劑盒的10126-A【2×Tissue Master Mix】保存在-20℃,避免反復凍融。
② 10126-B【Buffer AL】在常溫干燥條件下,可保存12個月,如需保存更長時間可置于4℃。
③ 10126-C【Protease】溶液具有獨特配方,常溫保存(25℃)可長期具有活性,在4℃保存,其活性和穩定性會更好,因此建議將其置于在4℃保存,請勿置于-20℃保存。
注意事項
1)本試劑盒適用于常規PCR,請勿用于多重PCR鑒定;建議擴增片段在1kb以內。
2)注意實驗用具的清潔以及實驗的操作手法,避免樣本間的交叉污染。
3)建議采用新鮮采取的動物組織,若為長期冷凍組織,應盡量避免反復凍融,否則會導致模板的降解,影響PCR效率。
4)Buffer AL若低溫保存,容易產生沉淀。在使用前務必將其在室溫中放置一段時間,也可在37℃水浴中預熱10min,以溶解沉淀,混勻后再使用。
5)電泳檢測時,切勿使用含有 SDS 的 Loading Buffer,否則在電泳時會在泳道中出現一大團拖尾亮帶,影響實驗結果。
6)建議設立陽性及陰性對照反應。陽性對照可用50ng純化的動物DNA為模板,陰性反應以ddH2O為模板,引物可采用以前成功擴增的引物。
7)為了您的**和健康,請穿實驗服并戴一次性手套操作。Animal Tissue Direct PCR Kit 動物組織直接PCR試劑盒
操作方法
1. 取5-10mg動物材料,置于離心管中。盡量剪碎動物材料,以使之后的酶解反應容易進行。
2. 取100μl Buffer AL并加入4μl Protease,渦旋混勻。
3. 向混合液中加入動物組織,渦旋混勻。
4. 65℃孵育10-30min,然后95℃處理5min。
【注】:65℃孵育,一般只需10min即可滿足多數PCR需求。若需要的DNA量較大或樣品較難酶解,可以將時間延長至30min。組織塊不需完全酶解,殘余的部分在后續離心步驟中可被除去。
5. 12,000 rpm (~13,400×g )離心5min。
6. 轉移上清至新的離心管,4℃或-20℃放置備用或直接用于PCR擴增。
Animal Tissue Direct PCR Kit 動物組織直接PCR試劑盒【注】:用于后續PCR檢測時,模板量占PCR體系的1-10%之間*佳,不能超過20%。如50μl 的PCR體系中,加入0.5-5μl 裂解液即可,但不能超過10μl。