Picogreen dsDNA Assay Kit 雙鏈DNA定量檢測試劑盒
產(chǎn)品描述
Picogreen是一種極為靈敏的熒光核酸染料，常用于雙鏈DNA的定量檢測。歷來DNA濃度的測定在cDNA文庫的構(gòu)建，DNA亞克隆、PCR產(chǎn)物的估測等領(lǐng)域中具有重要意義，疫苗等生物制品中殘留微量DNA的檢測更是直接關(guān)系到人類的健康。
常用的檢測核酸的方法有:1）紫外吸光法（A260），該法操作簡便，但DNA樣品中核苷酸、單鏈DNA、RNA和蛋白質(zhì)對紫外吸收信號影響很大，還容易受到核酸樣品中污染物的干擾，不能區(qū)分DNA和RNA，而且靈敏度低（ΔA260=0.1相當于5ug/ml的dsDNA）；2）探針雜交法，該法是傳統(tǒng)檢測微量DNA的常用方法，基本能滿足目前疫苗和**性生物制品的檢測需求，但是該法耗時較長，操作繁瑣，穩(wěn)定性、敏感性和特異性較差；3）Hoechst33258染料法，Hoechst33258是一種一定程度上特異于雙鏈DNA的核酸染料，基本不受蛋白質(zhì)等污染物的干擾，可以檢測低至10ng/ml的DNA；在檢測穩(wěn)定性和靈敏度上仍達不到理想效果。Picogreen dsDNA Assay Kit 雙鏈DNA定量檢測試劑盒
Picogreen dsDNA定量法：Picogreen僅在與DNA雙鏈結(jié)合后才發(fā)出熒光，且所產(chǎn)生的熒光與DNA濃度呈正比，在存在ssDNA、RNA和單體核苷酸的條件下，可以選擇性地檢測低至25pg/ml的dsDNA。該分析在三個數(shù)量級范圍內(nèi)呈線性，且?guī)缀鯚o序列依賴性，可以**地測量多個來源的DNA，包括基因組DNA、病毒DNA、小量提取DNA或PCR擴增產(chǎn)物。
相比傳統(tǒng)的方法，Picogreen dsDNA Quantitation Reagent定量具有以下優(yōu)勢：①靈敏度高：數(shù)量級較UV吸光讀數(shù)更敏感，可節(jié)省寶貴的樣品；②特異性強：在等摩爾的RNA存在的條件下，對dsDNA具有特異性；③耐受性好：耐受較高濃度的鹽、尿素、乙醇、氯仿、去垢劑、蛋白或瓊脂糖，可以直接定量PCR擴增產(chǎn)物而無需從反應(yīng)混合物中純化DNA。④易于使用——只需在樣品中加入染料，等待5分鐘，然后讀數(shù)即可，且適用于96和384孔板；與大多數(shù)基于熒光的酶標儀和熒光計兼容。⑤適用范圍廣：可適用于PCR的分析、芯片樣品、DNA損傷分析、酶活性分析、基因組DNA定量以及復雜混合物中dsDNA的檢測和病毒DNA定量等多種領(lǐng)域。Picogreen dsDNA Assay Kit 雙鏈DNA定量檢測試劑盒
若每次分析體積為2 mL，本試劑盒各組分試劑足夠200次分析使用，若使用微孔板或96孔板檢測，每次使用量200μl，則各組分試劑足夠2000次分析。
產(chǎn)品組分
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編號
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組分名稱
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產(chǎn)品編號/規(guī)格
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保存
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10225ES84/2000T
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10225-A
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Picogreen dsDNA Quantitation Reagent
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100μl×10
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2~6℃避光干燥
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10225-B
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2×TE buffer
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50ml
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2~6℃（短期）或-20℃（長期）
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10225-C
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Calf thymus DNA standard (100μg/ml)
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1ml
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2~6℃（短期）或-20℃（長期）
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運輸和保存方法
冰袋運輸。Picogreen dsDNA Assay Kit 雙鏈DNA定量檢測試劑盒
保存方法參照【產(chǎn)品組分】各組分保存方式。其中2×TE buffer和Calf thymus DNA standard若不經(jīng)常使用，請置于-20℃長期保存。
注意事項
1）Picogreen定量試劑含有DMSO（已知有毒試劑），請小心操作；
2）盡管目前尚未有數(shù)據(jù)表明Picogreen具有誘變性和毒性，但是該試劑能結(jié)合雙鏈DNA，請操作時務(wù)必小心。
試劑準備
1）1×TE buffer 的配制：將2×TE 用無菌去離子水（不含Dnase）等體積稀釋至1×工作液。
2）PicoGreen工作液的配制：使用前將PicoGreen dsDNA定量試劑回溫至室溫；PicoGreen是以100μL 200×的濃縮液形式保存于無水DMSO中的（共10管）。實驗當天，根據(jù)實驗需求用1×TE按1:200 的比例稀釋適量定量試劑濃縮液。例如要準備足夠的操作溶液以2ml檢測體系測定20個樣品，可向19.9mL1×TE 中加入100μL PicoGreen dsDNA 定量試劑。
【注】：a、由于試劑容易吸附到玻璃表面，要在塑料容器中配制。
b、PicoGreen 試劑見光易降解，所以應(yīng)將配好的溶液用鋁箔包住或放置暗處避光保存。
c、溶液*好在配制好數(shù)小時內(nèi)使用，以保證*佳結(jié)果。Picogreen dsDNA Assay Kit 雙鏈DNA定量檢測試劑盒
