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產(chǎn)品資料

自誘導(dǎo)培養(yǎng)基

如果您對該產(chǎn)品感興趣的話,可以
產(chǎn)品名稱: 自誘導(dǎo)培養(yǎng)基
產(chǎn)品型號: HZ100825-200
產(chǎn)品展商: HZbscience
產(chǎn)品文檔: 無相關(guān)文檔

簡單介紹

自誘導(dǎo)培養(yǎng)基主營產(chǎn)品包括RNA純化系列、DNA純化系列、電泳及回收系列、克隆表達(dá)系列等在分子水平上,分子生物學(xué)著重研究的是大分子,自誘導(dǎo)培養(yǎng)基主要是蛋白質(zhì),核酸,脂質(zhì)體系以及部分多糖及其復(fù)合體系。而一些小分子物質(zhì)在生物體內(nèi)的轉(zhuǎn)化則屬生物化學(xué)的范圍.


自誘導(dǎo)培養(yǎng)基  的詳細(xì)介紹

自誘導(dǎo)培養(yǎng)基RealTime PCR技術(shù)服務(wù):

一、熒光定量PCR化學(xué)原理介紹  

實(shí)時熒光定量PCR技術(shù)即是在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團(tuán),利用熒光信號實(shí)時監(jiān)測整個PCR進(jìn)程,*后通過標(biāo)準(zhǔn)曲線對未知模板進(jìn)行定量分析的方法。PCR擴(kuò)增時在加入一對引物的同時加入一個特異性的熒光探針,該探針為一寡核苷酸,兩端分別標(biāo)記一個報(bào)告熒光基團(tuán)和一個淬滅熒光基團(tuán)。探針完整時,報(bào)告基團(tuán)發(fā)射的熒光信號被淬滅基團(tuán)吸收;PCR擴(kuò)增時,Taq酶的5'-3'外切酶活性將探針酶切降解,使報(bào)告熒光基團(tuán)和淬滅熒光基團(tuán)分離,從而熒光監(jiān)測系統(tǒng)可接收到熒光信號,即每擴(kuò)增一條DNA鏈,就有一個熒光分子形成,實(shí)現(xiàn)了熒光信號的累積與PCR產(chǎn)物形成完全同步。

二、自誘導(dǎo)培養(yǎng)基主要實(shí)驗(yàn)步驟

1、設(shè)計(jì)并合成Realtime PCR引物。

2、引物溶解后使用Promega的TaqDNA聚合酶進(jìn)行含SG(SYBR® Green)的PCR反應(yīng)的優(yōu)化。

3、 樣品RNA抽提   實(shí)驗(yàn)對象為組織樣品,取適量(50-100mg)新鮮組織樣品或正確保存的組織樣品加1ml的RNA抽提試劑Trizol(Invitrogen),勻漿后抽提RNA。

實(shí)驗(yàn)對象為細(xì)胞樣品,每份樣品取1×106~1×107細(xì)胞,PBS清洗細(xì)胞,去PBS加1ml的RNA抽提試劑Trizol(Invitrogen),裂解后抽提RNA

4、RNA質(zhì)量檢測

a. 自誘導(dǎo)培養(yǎng)基紫外吸收測定法測定RNA在分光光度計(jì)260nm和280nm處的吸收值,以計(jì)算其濃度并評估RNA純度

b. 使用ambion公司的甲醛電泳試劑進(jìn)行變性瓊脂糖凝膠電泳,檢測RNA純度及完整性。

5、使用逆轉(zhuǎn)錄酶(Promega)進(jìn)行反應(yīng),將樣品RNA逆轉(zhuǎn)錄為cDNA。

6、 制備標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品:進(jìn)行相對定量,需要先將樣品的目的基因以及管家基因進(jìn)行PCR擴(kuò)增,其產(chǎn)物進(jìn)行梯度稀釋用于做標(biāo)準(zhǔn)曲線。

7、標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品和待測樣品分別加入到含SG的RealTime PCR反應(yīng)液中(其中TaqBeadTM熱啟動聚合酶來自Promega公司),進(jìn)行RealTime PCR擴(kuò)增和檢測。

8、 自誘導(dǎo)培養(yǎng)基檢測結(jié)果進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)曲線分析:以對待測樣品的目的基因進(jìn)行定量。相對定量實(shí)驗(yàn)需要進(jìn)一步用樣品的目的基因測得值除以管家基因測得值以校正誤差,所得結(jié)果代表某樣品的目的基因相對含量。

9、提供實(shí)驗(yàn)報(bào)告:包括詳細(xì)的實(shí)驗(yàn)方法及實(shí)時熒光定量PCR實(shí)驗(yàn)結(jié)果的相關(guān)圖表。

三、自誘導(dǎo)培養(yǎng)基樣本準(zhǔn)備

組織或細(xì)胞標(biāo)本

滬公網(wǎng)安備 31011702004356號

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