PinPoint Xa 蛋白純化系統用來生產和純化在體內連接了生物素的融合蛋白質。在一個載體上,將編碼需要純化蛋白質的DNA序列克隆在載體上的一個編碼體內添加生物素的短肽序列的下游。連接生物素的融合蛋白在大腸桿菌內生成,然后用SoftLink軟釋放抗生物素蛋白樹脂親和純化。這個樹脂是**技術,可將蛋白質以非變性形式洗脫出來。PinPoint載體的特點是含有編碼內源蛋白酶因子Xa(發音為Ten a)的蛋白水解位點,使得純化標簽可從天然蛋白上分離。載體還帶有方便得多克隆區域,便于構建融合蛋白。
系統的幾個載體含有所有可能的有義讀碼框,還含有連接著生物素的樹脂、一個純化柱以及生物素,PinPoint Xa對照載體含有氯素酶轉乙酰基酶(CAT)基因,作為監控蛋白表達、純化和加工條件的手段。在這個系統中,每升培養物一般產生1-5 mg蛋白。
特點
● 胞內添加生物素標簽:用于純化融合蛋白;得到的許多蛋白質是可溶的。
● 易于使用:可以通過柱子,也可以批量用SoftLink樹脂純化生物素標簽蛋白質。
● 便于檢測:鏈霉親和素堿性磷酸酶可用于檢測生物素標簽的融合蛋白質,以假-Western方式,監控純化過程。
● 靈活:所有讀碼框都有相應的PinPoint載體。
● 溫和釋放條件:SoftLink樹脂允許在非變性條件下釋放融合蛋白質。
● tac啟動子:可以嚴格調控表達。
應用
● 純化毫克數量的表達蛋白。
● 生產新穎的生物試劑。
● 與TetraLink 樹脂同用可以制造親和柱。