rRMECs【大鼠視網(wǎng)膜微血管內(nèi)皮細(xì)胞】代數(shù)低,狀態(tài)好,發(fā)貨快,細(xì)胞庫管理規(guī)范,種類齊全,價(jià)格優(yōu)惠,在做傳代細(xì)胞培養(yǎng)之前,首先將培養(yǎng)瓶置于顯微鏡下,觀察培養(yǎng)瓶中細(xì)胞是否已長成致密單層,如已長成單層,即可進(jìn)行細(xì)胞的傳代培養(yǎng)。
rRMECs【大鼠視網(wǎng)膜微血管內(nèi)皮細(xì)胞】描述
細(xì)胞生長:貼壁
細(xì)胞形態(tài):上皮細(xì)胞樣
細(xì)胞數(shù)量:1×106個(gè)
細(xì)胞傳代:1:3傳代,2-3天傳一代
細(xì)胞純度:92.2%
細(xì)胞活力:88.4%(Viability by Trypan Blue Exclusion)
細(xì)胞檢測:細(xì)胞不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、**、酵母和**
細(xì)胞凍存:液氮凍存(完全培養(yǎng)基+10%DMSO+20%FBS)
細(xì)胞運(yùn)輸:干冰運(yùn)輸(1
Vial)或活細(xì)胞運(yùn)輸(T-25
flasks)
細(xì)胞用途:只可用于科研,不可用于臨床診斷和**
rRMECs【大鼠視網(wǎng)膜微血管內(nèi)皮細(xì)胞】培養(yǎng)條件
DMEM,90%;上等胎牛血清,10%
氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%
溫度:37攝氏度
rRMECs【大鼠視網(wǎng)膜微血管內(nèi)皮細(xì)胞】傳代方法
顯微鏡下觀察細(xì)胞,當(dāng)覆蓋80%底面積時(shí),進(jìn)行細(xì)胞傳代。注意不要等到細(xì)胞覆蓋100%的時(shí)候才傳代,那樣細(xì)胞容易老化。在生物**柜或者超凈臺(tái)中,將培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基倒到廢液缸中用PBS或者生理鹽水洗一遍加入1.5ml
0.25%含有EDTA的胰酶,在37℃培養(yǎng)箱中消化3-5分鐘后取出細(xì)胞,加入5ml培養(yǎng)基,吹打均勻后,轉(zhuǎn)移到15ml離心管中,1000rpm 離心5分鐘離心后,去掉上清,用新鮮培養(yǎng)基重懸細(xì)胞,按照1:3的比例進(jìn)行細(xì)胞傳代培養(yǎng)。
rRMECs【大鼠視網(wǎng)膜微血管內(nèi)皮細(xì)胞】傳代密度均勻,有以下幾點(diǎn)比較重要:
1.盡量消化細(xì)胞分散成單細(xì)胞懸液。對(duì)于易于消化的細(xì)胞,我一般DPBS清洗一遍,加0.5ml胰酶潤洗一遍(25cm2培養(yǎng)瓶或6孔板),棄掉胰酶,37度消化2-3分鐘或室溫消化5min左右,鏡下觀察是否細(xì)胞消化較為分散。如果不夠,延長消化時(shí)間。我見過有些剛進(jìn)實(shí)驗(yàn)室的師弟師妹,一上來就加1-2ml胰酶,結(jié)果細(xì)胞團(tuán)大片脫落,雖然有后續(xù)吹打步驟,但我覺得效果不佳。至于難消化的細(xì)胞,怎么掌握分寸,還待自己摸索或其他戰(zhàn)友分享。
2.在以上基礎(chǔ)上,我覺得細(xì)胞吹勻,這步比上述提到的十字移動(dòng)等更為重要。如傳代1:4 ,可以收集所有細(xì)胞至離心管,加入培養(yǎng)液重懸混勻,吸管緩慢吹打20-30次,可配合水平搖晃離心管。
3.此外我覺得培養(yǎng)液的量可能也會(huì)有講究,如6孔板中你*終加入2ml細(xì)胞懸液,尤其像這樣的小面積培養(yǎng)皿,液體表面有張力,細(xì)胞易于聚集在中間,所以我一般6孔板再加1ml以消除影響,吸管緩慢吹打15-20次左右繼續(xù)混勻。
生長特性:貼壁
培養(yǎng)條件:DMEM+10% FBS
傳代方法:1:3-1:8傳代,每周換液2次。
背景:MRC-5細(xì)胞系來自14周齡男性胎兒的正常肺組織,該細(xì)胞老化前能傳代42到46次群體倍增。它是正常二倍體細(xì)胞系,46,XY核型。模式染色體數(shù)為46,概率為70%。
細(xì)胞簡稱:U-87MG(U87MG,U-87 MG)細(xì)胞
細(xì)胞名稱:U-87MG(U87MG,U-87 MG);人腦星形膠質(zhì)母細(xì)胞瘤
組織來源:星形膠質(zhì)
規(guī) 格:T25培養(yǎng)瓶,1×106cells
形態(tài)特征:貼壁/上皮細(xì)胞樣
生長特性:貼壁
培養(yǎng)條件:DMEM+10% FBS
傳代方法:1:3-1:8傳代,每周換液2次。
背景:該細(xì)胞系由Ponten J等建立,源于惡性神經(jīng)膠質(zhì)瘤.裸鼠皮下接種可成瘤。
細(xì)胞簡稱:A2780/Taxo1細(xì)胞
細(xì)胞名稱:A2780/Taxo1;人卵巢癌紫衫醇耐藥株