ELISA酶聯**吸附,間接法測定抗體的問題
ELISA酶聯**吸附,間接法測定抗體,為何不能直接將待測抗體直接用酶標記,然后直接加底物。而要加酶標抗抗體。 1:待測抗體一般是**后產生的抗體,其中有**失敗和抗體過少等因素存在,用酶標記有許多不確定性,如用酶標記前期有測不出效價的可能,造成不必要的困惑。 2:ELISA酶聯**中酶標抗抗體和抗體結合后有巨大的信號放大作用,可以將信號擴大千倍以上,適合于較低抗體量的測定。 3:篩出單抗后可以考慮直接酶標抗體,不過在確定測定體系上要費不少功夫。
如果將酶標記到待測抗體上,相對經典的間接法更加繁瑣,而且你在 摸索標記條件時不能保證操作失誤導致待測抗體失活;酶標二抗現在是已經商品化了的,被大規模生產,購買后使用方便。如果你的間接做的好的話,方法被優化了后,一抗二抗顯色,總共的時間加起來,出結果不會超過2-3小時。 其實你的意思就是減少反應步驟,節約反應時間??梢杂弥苯覧LISA法,就是用抗體包板,在抗原上標記酶,然后顯色,這樣與間接法相比就減少了一步,縮短了時間。 但是,直接法和間接法,他們各有優缺點,要根據你的具體要求而定了。
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