1.當(dāng)細(xì)胞鋪滿整個(gè)平皿(100mm)后,吸棄舊培養(yǎng)液，10mLPBS洗一遍
2.0.25%胰酶（預(yù)熱20分鐘左右）2ml消化，輕輕搖晃，直至肉眼見(jiàn)單層細(xì)胞呈塊狀脫落（或在顯微鏡下觀察細(xì)胞之間分離），立刻加5ml(DMEM+10%FBS)終止消化，輕柔吹打8-10次成單細(xì)胞。
3.離心1000rpm*5min,棄上清，加DMEM+10%FBS輕柔吹打。
4.將細(xì)胞懸液1:4傳到100mm細(xì)胞培養(yǎng)皿中，每個(gè)皿加10ml(DMEM+10%FBS)培養(yǎng)液，正常情況下2-3天就可以長(zhǎng)滿，期間不用換液。
因?yàn)槲覀冇蔑曫B(yǎng)層細(xì)胞鋪皿而不是明膠包被，所以細(xì)胞系傳代之前必須處理飼養(yǎng)層細(xì)胞。
1.飼養(yǎng)層細(xì)胞STO處理：當(dāng)STO鋪滿平皿后，向培養(yǎng)液中加入100ul 1mg/mlmitomycinC(toxic, 操作時(shí)不要接觸，作用是抑制STO增殖)，輕輕搖晃平皿，保證絲裂霉素分布均勻，放置于培養(yǎng)箱中處理2h后，吸棄培養(yǎng)液，10mlPBS洗兩遍（目的是把mitomycinC洗凈），0.25%胰酶消化，5ml(DMEM+10%FBS)終止，離心1000rpm*5min棄上清，加DMEM+10%FBS后吹打均勻，種到新的100mm細(xì)胞培養(yǎng)皿，補(bǔ)齊培養(yǎng)液至10ml。置于培養(yǎng)箱中過(guò)夜。
2.**天早上傳干細(xì)胞：
（1）細(xì)胞系傳代吸棄舊培養(yǎng)液，10mlPBS洗一遍，2ml 0.25%胰酶消化，邊消化邊輕輕晃動(dòng)培養(yǎng)皿，4-5min后鏡下觀察發(fā)現(xiàn)發(fā)部分細(xì)胞脫落，成小的細(xì)胞團(tuán)塊，加8ml DMEM+10%FBS終止消化，輕柔吹打。
（2）然后將液體轉(zhuǎn)移到15ml塑料離心管中，靜置10-15min，吸棄上清，加2mlES培養(yǎng)液。
（3）將滴管在酒精燈下拉成非常細(xì)的玻璃管，吹打1－2次，盡量將ES吹散
（4）將前**鋪好的STO的培養(yǎng)液吸棄，換成10ml的ES培養(yǎng)液（操作要小心，不然STO很容易脫落），再把塑料離心管中的ES1:3或1:4(視情況而定)傳到鋪好的STO皿中，前后左右垂直晃動(dòng)幾下，使干細(xì)胞分布均勻，置于培養(yǎng)箱中，每天換液，兩到三天傳代。
細(xì)胞系傳代應(yīng)該注意的問(wèn)題：
1.STO不管是在ES傳代還是換液過(guò)程中都可能因?yàn)榧右后w速度過(guò)快而脫落，所以*好靠近培養(yǎng)皿壁先一滴一滴加，避免液體直接打在STO上。
2.玻璃管拉得盡量細(xì)一些。
3.一定要把mitomycin洗干凈
我養(yǎng)過(guò)很多細(xì)胞，腫瘤細(xì)胞和正常細(xì)胞都有，總的感覺(jué)是腫瘤細(xì)胞要比正常細(xì)胞好養(yǎng)。先介紹一下目前手頭正在養(yǎng)的兩株細(xì)胞。
SNU-398:人肝癌細(xì)胞，培養(yǎng)液是1640+10mmol/LHEPES+1mmol/L丙酮酸鈉+1.5g/L碳酸氫鈉+10％FBS
PLC/PRF/5：人肝癌細(xì)胞，培養(yǎng)液是EMEM+0.1mmol/L非必需氨基酸+1mmol/L丙酮酸鈉+1.5g/L碳酸氫鈉+10％FBS
消化液是0.25％胰酶+0.03％EDTA
兩株細(xì)胞都是貼壁細(xì)胞，SNU－398消化時(shí)需先加入1ml（25cm2）消化液，使消化液均勻覆蓋瓶底后倒掉，然后再加入1ml消化液，室溫放置3分鐘左右，加入培養(yǎng)液8ml中止消化，吹打使細(xì)胞分散（動(dòng)作要輕，避免氣泡），再分別將細(xì)胞液各3ml加入另外兩個(gè)新瓶子，添加培養(yǎng)液至8ml/瓶，繼續(xù)培養(yǎng)
PLC/PRF/5消化時(shí)只需加入1ml（25cm2）消化液，細(xì)胞系傳代使消化液均勻覆蓋瓶底后靜置5分鐘左右，輕拍培養(yǎng)瓶幾下，然后加入培養(yǎng)液，一般也是一傳三，操作同SNU-398。

HZ-3/DDP 卵巢癌順鉑耐藥株
HZco-2 結(jié)腸癌細(xì)胞
HZLa 宮頸癌細(xì)胞
HZLo205 結(jié)腸癌細(xì)胞
HZlaS3 宮頸癌細(xì)胞
HZ320DM 結(jié)腸癌細(xì)胞
HZC-1B **內(nèi)膜癌細(xì)胞
HZCT-8 回盲腸腺癌細(xì)胞
HZEG-3 絨癌細(xì)胞
HZCT-116 低分化結(jié)腸腺癌細(xì)胞
HZU-145 前列腺癌細(xì)胞
HZT-29 結(jié)腸腺癌細(xì)胞
HZNCa 前列腺癌細(xì)胞
HZovo 結(jié)腸癌細(xì)胞
HZone 前列腺癌細(xì)胞
HZ480 結(jié)腸癌細(xì)胞
HZC-3 前列腺癌細(xì)胞
HZ-7402 肝細(xì)胞癌細(xì)胞
HZsu-Pr1 非雄**依賴型前列腺癌
HZC-9204 肝癌細(xì)胞
HZOS 骨肉瘤細(xì)胞
HZ3B 肝癌細(xì)胞
HZG-63 成骨肉瘤細(xì)胞
HZG2 肝癌細(xì)胞
HZos-2 骨肉瘤細(xì)胞
HZ-7721 肝癌細(xì)胞
HZ-2 OS 骨肉瘤細(xì)胞
HZAN-1 胰腺導(dǎo)管上皮癌細(xì)胞
HZS-732 骨肉瘤細(xì)胞（瘤株）
HZ1005 胰腺腺癌細(xì)胞
HZ-204 橫紋肌肉瘤細(xì)胞
HZW1990 胰腺腺癌細(xì)胞
HZ1080 纖維肉瘤細(xì)胞